گزارش كارآموزي بررسی آزمايشگاه داروسازي

دسته بندي : علوم پزشکی » پزشکی
گزارش كارآموزي بررسي آزمايشگاه داروسازي در 92 صفحه ورد قابل ويرايش



روش اندازه گيري مفناميك اسيد در كپسول 250 ميلي گرم (تيتريسمتري) تعداد 20 عدد كپسول را خالي كرده و پودر داخل آن را كاملا مخلوط مي كنيم تا به طور يكنواخت گردد از اين پودر مقدار 0.5 گرم مفناميك اسيد (0.6 گرم) را دقيقا وزن كرده و در 100 ميلي ليتر اتانول گرم (كه قبلا نسبت به محلول فنول رد خنثي شده باشد) حل كنيد.

محلول حاصل را در مقابل اندي كاتور محلول فنول دو با محلول NaoH 0.1 مولار تيتر نماييد هر ميلي ليتر از محلول NaoH 0.1 مولار معرفي معادل با 24.13 ميلي گرم از مفناميك اسيد مي‎باشد مقدار ميلي گرم مفناميك اسيد موجود درهر كپسول از فرمول زير محاسبه مي‎شود.

ميلي گرم مفناميك اسيد موجود هر در كپسول=* 24.13 كه درآن تا حجم معرفي از محلول NaoH 0.1 مولار برحسب ميلي ليتر مي‎باشد Limits:(237.5 to 262.5)

Ref: B.P ((1996), p:1793

شماره پنج 0.09

وزن پودر و كاغذ صافي 0.4022 gr

وزن كاغذ صافي - 0.0014 gr

وزن واقعي پودر

در 100 cc الكل 2 الي 3 قطره اندي كاتور مي ريزيم رنگ از رنگ زرد به قرمز پوست پيازي تبديل مي‎شود سه قطره سود NaoH 0.1 مولار ريختيم رنگش دوباره زرد شد كه اين كار به معني خنثي شدن است سپس با ريختن 0.6 گرم پودر مفناميك اسيد داخل الكل بعد از مگنت استفاده كرديم كه پودر كاملا در الكل حل شود و 20 دقيقه براي حل شدن به آن زمان مي دهيم.

فنل زرد: Hand book of chewistry and Physics (CRC)

رنگ از زرد به قرمز پوست پيازي

فرمول مفناميك اسيد 105% تا 95 C15H15NO2­

دليل استفاده از اندي كاتور: تغيير رنگ در يك PH خاص تغيير رنگ از حالتي به حالتي ديگر

چه از سود استفاده مي كنيم كه چون واكنش اسيد و باز براي خنثي كردن همديگر

عمل تتراسيون:

در بورت NOH-1 0.1 مولار در ارلن الكل + پودر+ فنل دو:

20.9= V مصرفي ازبورت

فرمول گسترده: عدد جرمي 241.29












انواع اسم هاي تحاري: ponstan و ponstel

حلاليت كم در آب در الكل حلاليت زيادي دارد.

در هيدروكسيدهاي قليايي حلال است نوشته شده از كتاب MERCK INDEX



بدست آوردن عدد 24.13 يا 24.129





Disnlotion انحلال:

زمان انحلال:

در محلول با حجم معين زمان مشخص غلظت خاصي را در دور مشخص (همزن) كپسول شروع به حل شدن مي‎كند و غلظت را اندازه مي گيريم بر حسب درصد

زمان باز شدن Disantegration آب روي صفحه 39 ، 750cc آب مقطر مي ريزيم.

آزمايش بعد:

مي خواهيم زمان باز شدن كپسول مفناميك اسيد را در بدن انسان اندازه گيري كنيم.

دستگاه Disantegration دما را به اندازه دماي بدن انسان 38 تنظيم مي كنيم تا هنگام باز شدن كپسول ها در آب و عبور آنها از توري بعد از 30 دقيقه از صافي عبور كرده و باز شد

آزمايش قبلي را با بچ 10 انجام مي دهيم.

محاسبات:





دستگاه Disantegration:

كپسول هاي مفناميك اسيد با بچ 10

براي باز شدن كپسول time= 15 min

روش تعيين مقدار ليتيم كربنات در قرص ليتيم كربنات

تعداد 20 عدد قرص را وزن كرده و كاملا پودر كنيد از اين پودر مقداري معادل با 1 gr ليتيم كربنات دقيقا توزين كنيد (1.367 gr) و در 100 ميلي ليتر آب مقطر ريخته و به اين مقدار 50 ميلي ليتر محلول هيدروليك Hcl اسيد 1 مولار US افزوده و به مدت 1 دقيقه min بجوشانيد و سپس سردكرده و قمدار اضافي اسيد را در مقابل معرف متيل اورانژ با محلول سديم هيدروكسايد 1 مولار (V.S) تيتر كنيد هر ميلي ليتر از محلول هيدروكلريك اسيد Hcl 1 مولار معادل 36.95 ميلي گرم از Li2 Co3 مي‎باشد.

مقدار ميلي گرم Li2 Co3 در هر قرص از فرمول زير محاسبه مي‎شود.



كه در آن Wa وزن متوسط قرص ها برحسب ميلي گرم (410) WS مقدار بر داشتي برحسب ميلي گرم (1365)

V حجم مصرفي سديم هيدروكسايد 1 مولار بر حسب ml

به طور ساده









وزن 20 عدد قرص+ كاغذ: 8.1475

وزن كاغذ: 5.2365-

3.9555= 7.9110

دليل جوشاندن: خارج شدن Co2 موجود در محلول

اول محلول را مي گذاريم تا به جوش بيايد بعد از جوش آمدن به مدت 1 دقيقه بجوشد تا Co2 محلول از آن خارج شود. طرز تهيه سديم هيدروكسايد 1 مولار NaoH در ظرفيت 1 نرماليته با مولاريته برابر هستند.

1نرمال= 1مولار

M:Na=40

40 گرم سود وزن كرديم در lit 1 آب حل كرديم و روي هم زن قرار داديم تا حل شود. اين واكنش گرمازاست اگر آب را به مقدار 1 Lit كم كم به سود بيفزاييم باعث مي‎شود كه از گرماي خود سود استفاده شود تا در آب بهتر حل شود.

در بورت اسيد Hcl

در ارلن سود N 0.1 نرمال و تيتراسيون را شروع مي كنيم بهترين معرف براي تيتراسيون اسيد و باز فنل فتالئين است كه 2.2 اسيد Hcl مصرف شد رنگ سود سفيد شد







از اين راه نرماليته سود رابدست آورديم.
آزمايش مجدد
روش تعيين مقدارليتيم كربنات در قرص ليتيم كربنات

10 عدد قرص ليتيم كربنات را پودر كرديم و 1.36 gr وزن نموديم سپس در100 ml آب و 50 cc محلول هيدروكلردريك 1.05Hcl نرمال حل نموديم و آنرا به مدت 1 min جوشانديم سپس در ظرف آب يخ قرار داديم و تا خنك شود بعد با محلول سود NaoH كرديم ضمنا معرف ما متيل اوران= مي‎باشد با مصرف 25.3 cc محلول ما از رنگ صورتي به زرد تبديل شد.



تمامي اعداد بر واحد mg ميلي گرم مي‎باشد.

براي تبديل از gr به mg در عدد 1000 ضرب مي كنيم:



Dissolutio قرص ليتيم كربنات

محيط: 900 ميلي ليتر آب مقطر

دور در دقيقه: 100 rpm

زمان: 30 دقيقه

طرز تهيه محلول استاندارد:

تعداد 30 ميلي گرم از ليتيم كربنات استاندارد را دقيقا توزين كرده و به بالن ژوژه 100 ميلي ليتري منتقل كرده سپس مقدار 20 ميلي ليتر آب مقطر و مقدار 0.5 ميلي ليتر هيدروكلرييك اسيد غليظ به آن افزوده خوب به خم بزنيد تا كاملا حل شود و با آب مقطر به حجم برسانيد و مخلوط نماييد.

مقدار 20 ميلي ليتر از اين محلول را به بالن ژوژه يك ليتري (1000 ميلي ليتر) منتقل كنيد. به آن تعداد 800 ميلي ليتر آب مقطر و مقدار 20 ميلي ليتري از محلول surfactant مناسب افزوده با آب مقطر به حجم برسانيد و مخلوط كنيد.

طرز تهيه محلول آزمايشي:

محلول تحت آزمايش قرص ليتيم كربنات را به بالن ژوژه يك ليتري منتقل كنيد و با آب مقطر به حجم برسانيد وخوب مخلوط كنيد. مقدار 20 ميلي ليتر از محلول صاف شده را به بالان ژوژه يك ليتري ديگري منتقل كرده و به آن مقدار 500 ميلي ليتر آب مقطر و يك قطره محلول هيدروكلريك اسيد غليظ و مقدار 20 ميلي ليتر از محلول sufractant مناسب افزوده و با آب مقطر به حجم برسانيد و مخلوط نماييد.

روش كار:

از دستگاه flam photometero مناسب استفاده مي كنيم. صفر و ضد دستگاه را تنظيم مي كنيم سپس ميزان نشر محلول استاندارد و محلول نمونه را در طول موج uvi nm اندازه گيري كنيد.

مقدار ميلي گرم Li2 Co3 در هر قرص از فرمول زير محاسبه كنيد

100 C (A/S)

كه در آن A و S به ترتيب اعداد خوانده شده از دستگاه براي محلول هاي نمونه و استاندارد مي باشند و C غلظت نهايي استاندارد بر حسب ميكروگرم بر ميلي ليتر مي‎باشد. تلورانس نبايد از 80% Li2Co3 تعداد مقدار نوشته شده بر روي اتيكت در مدت 30 دقيقه كمتر باشد. .

اقتباس از: U.S.P.XXIV,P.982(2000)

اين قرص براي اختلاف رواني و … مورد استفاده مي‎باشد.

تكرار ازمايش براي بار سوم:

روش تعيين مقدار ليتيم كربنات در قرص ليتيم كربنات:

از پودر قرص هاي ليتيم كربنات به مقدار 1.362 gr وزن مي كنيم وزن كاغذ صافي 0.1477 مي‎باشد پودر قرص را در 100 ml آب مقطر و 50 cc اسيد كلريك Hcl تيتر ازول Titeisol حل مي كنيم سپس به مدت 1 دقيقه مي جوشانيم و در ظرف سرد قرار مي دهيم تا سرد شود بعد با سود NaoH 1 نرمال تيتر مي كنيم معرف ما متيل اورانژ مي‎باشد. تغيير رنگ از صورتي به زرد تبديل شد. V=23.2cc حجم مصرفي



روش اندازه گيري اكسي متولون در قرص:




معرف لازم:

1- محلول اتانولي سديم هيدروكسايد (Ethanolic sodium hydroxide 0.01m)(0.0m) (420 ميلي گرم از سديم هيدروكسايد را در اتانول 96% حل و با آن به حجم 100 ميلي ليتر برسانيد)

وسيله هاي مورد لزوم:

1- هاون چيني 2- ترازوي حساس 3- بالن ژوژه 250 ميلي ليتري و 50 ميلي ليتري 4-پلي پت ژوژه 5 ميلي ليتري 5- دستگاه اسپكتروسكپي uv/vis باسلهاي مناسب

روش كار:

تعداد 20 عدد قرص اكسي متولون را در هاون كاملا پودر كرده و از اين پودر مقداري معادل با 25 ميلي گرم اكسي متولون را برداشته (239.5 ميلي گرم) و به بالن ژوژه 250 ميلي ليتري منتقل كنيد و در محلول اتانولي سديم هيدروكسايد (0.01m) حل و به حجم برسانيدو در صورت لزوم صاف نماييد. 15 ميلي ليتر اول از محلول صاف شده را دور بريزيد و از بقيه مقدار 5 ميلي ليتر را به بالن ژوژه 50 ميلي ليتري منتقل و با محلول اتانولي هيدروكسايد (0.01m) رقيق و به حجم برسانيد. خوب مخلوط كرده و جذب محلول حاصل را در طول موج 315 nm و با دستگاه اسپكتروسكپي مناسب در سل يك سانتي متري در مقابل بانك محلول اتانولي سديم هيدروكسايد (0.01m) اندازه گيري كنيد.

ميلي گرم اكسي متولون در هر قرص از فرمول زير محاسبه مي‎شود.



كه در آن:



s= مقدار برداشتي از نمونه برحسب ميلي گرم (239.5mg)

w= وزن متوسط قرص ها بر حسب ميلي گرم مي‎باشد. (479mg)

547= 1% A براي اكسيد متولون در طول موج 315nm مي‎باشد.

Ref: BP.(1998). P:1848

Limits: (45 to 55 mg/tab)

Dissolution براي قرص اكسي متالون

دستگاه و مواد لازم: Apparatus I: 100 rpm

مواد:

1- محلول پربوريك اسيد و پتاسيم كلرايد (0.2 مول):

مقدار 12.37 گرم از بوريك اسيد (H3Bo3) خشك شده در رده اي 120 تا 110 درجه سانتي گراد به مدت يكساعت و مقدار 14.91 گرم از پتاسيم كلرايد (KCL) را در آب مقطر حل كنيد و با آب مقطر به حجم 1000 ميلي ليتر برسانيد.

2- محلول NaoH (0.2 مول):

اين محلول را از محلول سديم هيدروكسايد نرمال كه روش تهيه و استاندارد كردن آن را در صفحه ضميمه توضيح داده شده است تهيه و دوباره استاندارد كنيد.
معرفها

محلول هيدروكلريك اسيد نرمال استاندارد شده

محلول سديم هيدروكسايد 0.5 نرمال استاندارد شده

روش عمل (كليه كارها در دماي انجام خواهد گرفت)

10 قرص را وزن كرده بدون هدر دادن به پودر تبديل كنيد و دقيقا مقداري برابر با وزن يك قرص به بشر 150 ميلي ليتر كنيد. دقيقا 50 ميلي ليتر آب مقطربه آن اضافه كرده به مدت يك دقيقه بهم بزنيد. (با بهمزدن مغناطيسي) سپس مقدار 30 ميلي ليتر محلول هيدروكلريك اسيد نرمال (V.S) به آن اضافه كنيد و دقيقا مدت 10 دقيقه بهم بزنيد (با بهمزدن مغناطيسي) بهم زدن راخاموش كرده و بلافاصله با استفاده از سوزن ‌ضعفهاي خاص بشر را خارج كنيد و سوزن را با 20 ميلي ليتر آب مقطر بداخل بشر شستشو دهيد و دوباره به مدت دقيقا 5 دقيقه بهم زن را روشن كنيد و سپس بلافاصله مقدار اضافي هيدروكلريك اسيد رابا محلول سديم هيدروكسايد 0.5 نرمال تيتر نماييد تا اينكه محلول مخلوط در 3.5Ph= مدت 10 تا 15 ثانيه يا بيشترباشد. مقدار عدد Meq اسيد مصرفي را براي هر قرص محاسبه كنيد.

U.S.P, XX III (1995) P.1732

زمان نشت كف:

ماكزيمم 180 ثانيه براي هر قرص





اساس روش:

يك مقدار معيني از نمونه كه داراي ساپمتيكون است به محلول كف كننده اسيدي شده تربتون 100 (Acidified foaming solution 1%) در 37 درجه سانتيگراد اضافه مي‎شود و در تحت شرايط مخصوص و به مدت معين تكان داده مي‎شود. سپس زماني كه لازم است تا كف نشت بكند اندازه گيري مي‎شود و بدين طريق نمونه مورد آزمايش اندازه گيري مي‎شود.

طرز تهيه محلول كف كننده:

يك محلول يك درصد وزني به حجمي تريتون در آب مقطر شرح زير تهيه كنيد:

10 گرم تريتون 100 را به يك بالن ژوژه ميلي ليتري 100 كه محتوي حدود 300 ميلي ليتر آب مقطر مي‎باشد اضافه كنيد به آرامي تكان بدهيد تا حل شود. 1.3 ميلي ليتر Hcl غليظ و 5 ميلي گرم رنگ آبي شماره FO &cl ، Blue 1 به آن اضافه كنيد و به آرامي تكان بدهيد. تا حل شود با آب مقطر به حجم برسانيد.

روش عمل:

با يك فرور 100 ميلي ليتري از محلول كف كننده را به يك سيلنير 250 ميلي ليتري منتقل كنيد در سيلندر را گذاشته و در حمام 37 درجه به مدت 20 دقيقه قرار دهيد. سيلندر از حمام 37 درجه در آورده به يك جانشين مشابه متصل كنيد يك قرص را كه قبلا در هاون پودر كرده اين تماما به سيلندر اضافه كنيد سر سيلندر را گذاشته عدد shakel را روي 10 تنظيم كنيد و سپس به مدت 10 ثانيه تكان بدهيد، سپس زمان نشت كف را با كرنومتر اندازه بگيريد. شروع آزمايش (بكار انداختن كرونومتر) بعد از 10 3ثانيه تكان دادن و در پايان آن موقعي است (متوقف كردذن كرونومتر) كه سطح بدون كف مايع ديده شود.
مفناميك اسيد

وزن پودر قرص: 0.6023 Bach: 16

محاسبه:
قرص ديفن هيدرامين

روش اندازه گيري ديفن هيدرامين هيدروكلرايد

ديفن هيدرامين

طرز تيهه محلول استاندارد

مقدار 40 ميلي گرم ازديفن هيدرامين هيدروكلريك استاندارد را دقيقا توزيع و آنرا در اسيد سولفوريك 0.1 نرمال حل و به حجم 100 ميلي ليتر برسانيد.

طرز تهيه محلول نمونه:

تعداد 20 عدد قرص را پودر كرده و مقدار 162 ميلي گرم از آن را كه معادل با 40 ميلي گرم از ديفن هيدرامين هيدروكلرايد دقيقا توزين و به داخل كانتور 125 ميلي ليتري ريخته 20 ميلي ليتر آب مقطر و 2 قطره محلول سولفوريك اسيد غليظ و به آن افزوده و با 20 ميليليتر اترا استخراج كنيد (‌دقيقه) فاز اتري را به داخل دكانتور 125 ميلي ليتري ريخته فاز اتري را با 10 ميلي ليتري محلول سولفوريك اسيد 0.1 نرمال به مدت ‌دقيقه استخراج نمايد و فاز اسيدي را به دكانتور اولي اضافه كنيد و خوب تكان دهيد و با محلول سديم هيدروكسايد نرمال (نيم ميلي ليتري) و قطره قطره اضافه كنيد تا نسبت به كاغذ PH قليايي شود سپس 3 بار هر بار 20 ميلي ليتر اتر استخراج كنيد (4 دقيقه) و فاز اتري جمع آوري شده را 3 بار هر بار با 25 ميلي ليتر محلول سولفوريك اسيد 0.1 نرمال استخراج كنيد(4 دقيقه) واستخراج شده ها را بالن ژوژه 100 ميلي ليتري ريخته و با محلول سولفوريك اسيد 0.1 نرمال به حجم برسانيد.

روش كار جذب محلول استاندارد و محلول آزمايشي را در طول موج 258 nm با دستگاه اسپكيروسكپي مناسب در سل يك سانتي متري اندازه گيري كنيد.

محاسبه:

مقدار ميلي گرم ديفن هيدرامين هيدروكلرايد در هر قرص از فرمول زير محاسبه مي‎شود.

(وزن متوسط يك قرص)

بطور ساده:



كه درآن:

جذب محلول فوفه در Au= 258 nm و جذب محلول استاندارد در As=258
قرص ديفن هيدرامين

طول موج nm 258

استاندارد: (اسيد سولفوريك 0.1 N) دستگاه را صفر مي كنيم با هر چيزي (ماده يا محلول) كه به حجم مي رسانيم با همان دستگاه اسپكتروفتومتر را صفر مي كنيم و بعد طول موج محلول را مي خوانيم

جذب محلول نمونه در 258 nm Au= 405

جذب محلول استاندارد در 258 nm As= 602

روش اندازه گيري ويتامين هاي E.D.A در شربت مولتي ويتامين بطريقه HPLG

تهيه محلول آزمايشي:

5 ميلي ليتري از شربت رابه يك قيف دكانتور منتقل كرده و به آن 15 ميلي ليتر آب مقطر افزوده و 5 بار هر بار با 40 ميلي ليتر كلروفرم استخراج كنيد كلروفرم هاي جمع آوري شده را از قيف پنبه دار و از روي سديم سولفات ايندو صاف نماييد و بوسيله خلاء “Rotavapor” تا مرحله نزديك خشك (در دماي زير 50 درجه سانتيگراد) تغيير نمائيد سپس باقيمانده را به كمك مقدار كمي كلروفرم به بالن ژوژه 10 ميلي ليتري منتقل كرده و به حجم برسانيد. مقدار 10 ميكروليتر از آن را به دستگاه تزريق نماييد.

تهيه محلول استاندارد ويتامين E استات ويتامين D و ويتامين A پالميتات:

الف) مقدار 1 گرم از ويتامين D مايع استاندارد را دقيقا توزين كرده و در 25 ميلي ليتر كلروفرم حل وبه بالن ژوژه 50 ميلي ليتري منتقل كرده وبا كلروفرم به حجم برسانيد (دقت اول ويتامين D).

ب) مقدار 250 ميلي گرم از ويتامين A پالميتات (1.000.000 واحد) منتقل كنيد. و با كلروفرم به حجم برسانيد. (دقت اول ويتامين A)

ج) مقدار 150 ميلي گرم از ويتامين E استات استاندارد را دقيقا توزين كرده وبه بالن ژوژه 100 ميلي ليتري منتقل كرده و در كلروفرم حل كنيد و به آن مقدار 10 ميلي ليتر از محلول رقت ويتامين A و 0.2 ميلي ليتر از محلول رقت اول ويتامين D را افزوده با كلروفرم به حجم برسانيد از اين محلول مقدار 10 ميكروليتر به دستگاه تزريق نماييد.

روش كار اندازه گيري ويتامين D، A و E:

دستگاه مورد استفاده LC Module L Water كه مجهز به ستون (3.6 300 mm Bondapak CL8) و فاز متحرك متانول (98%) و مواد مورد استفاده متانول ‌، با شماره 6007 آب مقطر دوبار تقطير شده كه بعد از مخلوط شدن از فيلتر 0.22 UM MILLIPORE صاف شده باشد (رتكتور uv 486 طول موج aufs= 2.328 براي ويتامين A طول موج aufs= 0.1, 284 براي ويتامين E) طول موج aufs= 0.03, 265 براي ويتامين D و همچنين ماگزيمم فشار برابر با 3000 خواهد بود FLOW Rate= 2 ml/min

از محلول نمونه و محلول استاندارد از هر كدام بعد از فيلتر Millex- Hr 0.45 به مقدار 10 ميكروليتر به طور اتوماتيك تزريق انجام مي‎گيرد زمان مورد نياز براي و تزريق برابر با 10 دقيقه مي‎باشد. محاسبات بوسيله دستگاه نرم افزار NEC power Mate 386.331 انجام گرفته است.

توجه شود تمام مراحل كار تا انجا كه ممكن است در تاريكي انجام گيرد و از تماس با مواد اكسيد كننده محافظت گردد.

روش اندازه گيري پيريدوكسين هايدروكلرايد در قطره مولتي ويتامين:

اساس كار براندازه گيري جذب نوري در طول موج مرئي بوسيله اندوفنل كه از اتصال پريدوكسين به 2،6- دي كلروكئيون كلريميد در يك بافر قليائي بدست مي‎آيد استوار است.

معرفهاي لازم:

1- محلول كلريميد:

100 ميلي گرم 2و 6- دي كلرويمنون (N-2.6- Trichloro-p_beuzoquiuine) را در 250 ميلي ليتر ايزوپروپانول (2- پروپانول) حل كنيد. اين محلول بايد در يخچال نگهداري شودو به مدت يك ماه قابل استفاده است و چنانچه رنگ محلول صورتي شده باشد نبايد مصرف شود

2- محلول آمونيا آمونيوم كلرايد (بافر):

160 ميلي گرم آمونيوم كلرايد را در 700 ميلي ليتر آب مقطر حل كرده و به آن 160 ميلي ليتر محلول آمونيوم هايدروكسايد اضافه كرده و مخلوط نماييد. سپس با آب مقطر به حجم يك ليتر برسانيد و خوب مخلوط نماييد. در باين محلول بايد هميشه كاملا بسته و محكم باشد تا غلظت آمونياك آن تغيير نكند.

3- محلول بوريك اسيد:

5 گرم بوريك اسيد را در 100 ميلي ليتر آب مقطر حل كنيد.
تهيه محلول استاندارد

دقيقا مقدار 100 ميلي گرم پيرپدوكسين ها هيدروكلرايد رفرانس استاندارد را كه قبلا در ويسكلوز روي فسفريك نپتواكسايد P2O5 به مدت 4 ساعت خشك شده را توزين كرده و در يك بالن ژوژه 1000 ميلي ليتري ريخته و در هيدروكلريك اسيد 0.1 نرمال حل كرده و به جسم برسانيد اين محلول بايستي درشيشه هاي قهوه اي و در يخچال نگهداري شود. (تا مدت 3 ماه پايدار بوده و مي توانند مورد استفاده قرار گيرد)

5 ميلي ليتر ازاين محلول را داخل بالن ژوژه 50 ميلي ليتري كرده را با آب مقطر به حجم رسانده و خوب مخلوط نماييد اين محلول داراي 0.01 ميلي گرم پپريد وكسين هايدروكلرايد در هر ميلي ليتر مي‎باشد. (اين محلول بايد تازه تهيه شود ولي در صورت نگهداري آن درجاي خشك و در ظروف با درب بسته و محكم مي‎توان به طور روزانه تهيه نمود)

50 ميلي ليتر از اين محلول را به يك ارلن ماير كه حاوي 25 ميلي ليتر ايزوپروپانول مي‎باشد منتقل كرده و مخلوط كنيد.

تهيه محلول آزمايشي:

5 ميلي ليتر از نمونه مورد آزمايش را در يك بالن ژوژه 50 ميلي ليتري منتقل كرده و با آب مقطر به جسم برسانيد. 5 ميلي ليتر از اين محلول را در يك بالن ژوژه 20 ميلي ليتري منتقل كرده و 200 ميلي گرم NaNo­3 به آن بيافزاييد. افزوده و با محلول سديم هايدروكسايد 0.1 نرمال به حجم برسانيد. 5 ميلي ليتر از اين محلول را به يك سيلندر كه محتوي 25 ميلي ليتر الكل ايزوپروپانول است منتقل كنيد و خوب تكان دهيد.

روش عمل:

چهار لوله آزمايش بزرگ انتخاب كرده و از يك تا چهار شماره گذاري كنيد. در دو لوله اول و دوم در هر كدام 5 ميلي ليتر از (ايزوپروپانول محلول استاندارد) و در هر چهار لوله آزمايش يك ميلي ليتر محلول سديم استات (يك در پنج) و يك ميلي ليتر محلول بافر آمونياك آمونيوم كلرايد افزوده و در لوله دوم و چهارم يك ميلي ليترلب از هر افزايش لوله ها را خوب تكان داده و لوله هاي آزمايش را تا دماي خنك كرده به لوله اول 1 ميلي ليتر محلول كلريد افزوده و تكان دهيد و بعد از 60 ثانيه جذب اين محلول را در طول 650 نانومتر با يك دستگاه اسپكتروفتومتر منابس اندازه گيري كنيد(Au).